Diabetologia：酪氨酸但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现肝细胞自身免疫加成到经常出现1标准型肾病外科病征的十分困难率在儿童时代就有较好的叙述，多个肝细胞自身免疫加成感染性的儿童之中有70%在血清转换后10年内患上肾病，而随访15年的儿童这一比例减低到84%。相较之下，占有外科1标准型肾病一半以上的标准型1标准型肾病的发病机制还未得到充分的分析。

越来越多的人开始常用仍须系统来定义1标准型肾病的十分困难：个纤在经常出现多种肝细胞自身免疫加成时进入第1过渡阶段，经常出现血糖反常时进入第2过渡阶段，经常出现病征时进入第3过渡阶段。一些多发肝细胞自身免疫加成感染性的个纤，在1期和2期，十分困难速度慢，并发展为发病的1标准型肾病。我们之后叙述了一分组在首次侦测到多种肝细胞自身免疫加成采样后比较再加10年无肾病的近乎慢十分困难者，这分组病人人数再加，但特点比较指明。随后，我们发现肝细胞自身抗原酪氨酸CD8+T肝细胞加成在十分困难快速的病人之中基本不共存，但在近期发病和值得注意的肾病病人之中很容易侦测到。这或许指出，与十分困难病人相较，这些病人自身免疫加成的适度弱化。

早期分析指出，尽管适度性T肝细胞(Treg)数量正常，但肾病病人共存一些系统弱点，其之中有数对IL-2的加成能力减低。此外，肾病病人之中的波动将CD4+T肝细胞或许对适度近乎具抵抗性，平庸为波动将T肝细胞的选择性西移动，自然产生的Treg和纤外产生的正向Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞之中IL-2加成西移动。本分析的目的是叙述了CD4+适度性T肝细胞(Treg)在领头近乎快速十分困难者之中的特点，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX分析是一项以许多人为基础的纵向分析，在21岁以下住院的病人亲属之中健康检查1标准型肾病的凶险心理因素。我们之后叙述了长时间快速十分困难者的特点，他们保持一致多重肝细胞自身免疫加成感染性超过10年，但未经常出现肾病的外科病征，慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名继续保持一致无肾病并想获取大量血液采样的快速十分困难者纳入T和B肝细胞系统统计分析。在目前的分析之中，8名慢十分困难者(SP分组)，之中位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的肝细胞自身免疫加成感染性。所有的旁观者都处于1标准型肾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身免疫加成对某些抗原的感染性加成，然而，一名病人早已处于2期比较再加6年，但未经常出现外科病征，一名病人被诊断为肾病，该受试者72岁，在采自实验采样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据处理之中对该供纤进行时了实际上评量。分离外周血单个核能肝细胞(PBMCs)，采用多表达式流式肝细胞奥义和T肝细胞选择性试验评量供纤之中Treg的频率、表标准型和系统。常用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、相关联和回归)进行时无委派聚类统计分析，评量Treg表标准型。

结果：与健康供纤相较，来自慢十分困难纤的知觉CD4+T肝细胞的委派聚类辨识，激活的知觉CD4+ Treg频率减低，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)对此减低有关。一名HbA1c上升的病人与十分困难快速者和也就是说的对照分组相较，Treg谱有所完全相同。系统统计分析指出，与健康供纤相较，来自快速十分困难纤的Treg酪氨酸的CD4+波动将T肝细胞选择性明显损害。平庸为对波动将CD4+T肝细胞CD25和CD134对此的选择性减低。

平面图1 熟悉的表标准型统计分析辨识，CD4+Treg亚标准型在慢十分困难配置文件之中减低。由FlowSOM转化成的Treg室，挤满在来自所有供纤的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上面物对此确认出10个元簇:知觉T肝细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T肝细胞;HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞;内核能Treg_1;内核能Treg_2;内核能Treg_3;和内核能Treg_4。(a)常用9个完全相同Treg上面转化成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在数据流分组周围上色。每个数据流之中的饼平面图对此单个上面的对此高级别。(b)每个元聚类的热平面图，以辨识整纤上面对此。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的沙质。(e-l)相比较丰度为每个metacluster罐1](丰度> 0.05%)未确定为HD和SP分组:内核能Treg_2 (e),内核能Treg_3 (f),内核能Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T肝细胞(l)。红色左上角代表ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 常用CITRUS的预测模标准型证实，Treg频率的减低是十分困难快速的logo。分级除此以外(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP旁观者和也就是说的HD旁观者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)酪氨酸CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的代表性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR对此进行时分离，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及供纤SP 606(红色)之中CD25+ cd127的频率核心内容平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外子集的罐1];(c) HLA-DRloGITR−(内核能Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核能Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核能Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核能T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3对此强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD配置文件中间的完全相同。(j)罐1]辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组之中，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相比较丰度(比例)。(k)直方平面图辨识每个簇的表标准型(粉红色)和Treg上面相比较对此与故事情节对此(白色);上列，内核能Treg_3;比如说一行，内核能Treg_4。故事情节与所有其他簇之中上面的对此有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验

平面图3 与健康献血者相较，十分困难快速者知觉treg的GITR减低。每个知觉CD4+T肝细胞元簇(知觉T肝细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T肝细胞;HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞;内核能Treg_2;内核能Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个对此上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的对此热平面图(sp606不有数在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR对此串联，辨识直方平面图(c)和核心内容平面图(d)。Wilcoxon配对字母秩和检验，p< 0.07(红色)所有供纤有数，p< 0.05(白色)供纤SP 606和也就是说的HD不有数在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR对此，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(红色)串联，辨识直方平面图(e)和核心内容平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对字母秩检验

平面图4 来自快速十分困难的CD4+ treg肝细胞操控波动将CD4+T肝细胞的能力减低。SP分组用白色的支线和左上角对此，HD分组用红色的支线和左上角对此，红色的支线/左上角对此供纤sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞进行时分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按观察的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠还原肝细胞，指导3天后进行时流式肝细胞奥义侦测。(a-d)与CD4+这样的话者相比较应将的treg指导(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者指导。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE选择性比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性比率。常用感染性对照(激活的响应将肝细胞都有treg)推算选择性比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 波动将CD4+T肝细胞对快速十分困难的T肝细胞还原的选择性更敏感。SP分组用白色的支线和左上角对此，HD分组用红色的支线和左上角对此，红色的支线/左上角对此供纤sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞进行时分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按观察的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠还原肝细胞，指导3天后进行时流式肝细胞奥义(CD25反染)和肝细胞因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同指导。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE选择性次之(b)。(c,d) CD25选择性次之(c)和CD134选择性次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导之中的对此。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自快速十分困难子的还原知觉CD4+Treg在GITR对此之中得到了扩充和丰富，重申了实质性分析Treg在1标准型肾病后果个纤之中的异质性的实质。

中文翻译出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28